Хондроитин сульфат количественное определение

СОДЕРЖАНИЕ
0
31 просмотров
03 июня 2019

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Анализ и стандартизация хондроитинсульфата натрия

На правах рукописи

ШКАРИНА Татьяна Николаевна

АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТА НАТРИЯ

15.00.02 — Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Институте стандартизации и контроля лекарственных средств Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора

доктор фармацевтических наук, профессор

Доктор фармацевтических наук

Доктор химических наук, член-корр. РАН, профессор

Багирова Валерия Леонидовна

Каухова Ирина Евгеньевна

Дюмаев Кирилл Михайлович

ФГУ «Государственный институт кровезаменителей и медицинских препаратов»

После проведения теоретического и экспериментального исследования в проект ФС введены новые показатели чистоты субстанций ХСН: свободные сульфаты и хлориды (показатели, свидетельствующие о полноте отмывки от используемых в процессе выделения ХСН кислот, щелочей), содержание белка (характеристика отделения от связанного с ХСН в составе протеогликанов белка) и родственные вещества (примеси глико-заминогликанов).

Количественное определение ХСН

Существуют две фармакопейные методики количественного определения ХСН.

Методика 1 основана на кислотном гидролизе ХСН и последующем спектрофотометрическом определении его по уроновым кислотам, входящим в состав дисахаридной единицы ХСН (метод Дише).

В методике 2 используется турбидиметрическое титрование, основанное на способности ХСН образовывать с цетилпиридиния хлоридом нерастворимую в воде ионную пару.

В обеих методиках используются стандартные образцы ХСН.

Для сравнения методик была использована процедура валидации. С этой целью был проведен трёхуровневый эксперимент по три опыта на каждом уровне. Диапазон измерений был выбран, исходя из варьирования навески вещества (табл. 5). Перед началом анализа все образцы высушивались при температуре 105 °С до постоянной массы.

При проведении методики 2 использовали визуальную регистрацию точки эквивалентности, титрование проводили 0,4 % раствором цетилпиридиния хлорида при интенсивном перемешивании до образования крупных белых хлопьев (при этом раствор становился прозрачным).

В обеих методиках в качестве стандартного образца использовался ГСО ХСН.

Статистическая обработка результатов эксперимента (табл.3) проводилась по ГФ XI. Полученные результаты были проверены на однородность выборки с помощью (^-критерия и установлено, что они не отягощены грубой погрешностью.

Установлено, что зависимости между навеской субстанции и оптической плотностью (методика 1) и объемом титранта (методика 2) имеют линейный характер (г! = 0,999806; г2 = 0,999988) и описываются уравнениями:

у,= 5,1681х-0,002 (Методика 1); у2= 128,14х + 0,1874 (Методика 2).

Рис. 9. Зависимость оптической плотности испытуемых растворов от количества ХСН (Методика 1).

0,0000 0,0100 0,0200 0,0300 0,0400 0,0500 0,0600 0,0700 навеска, г

Рис. 10. Зависимость объема титранта от количества ХСН (Методика 2).

Методики сравнивали по средним значениям и дисперсиям. Величина критерия Стьюдента (1,55) была меньше табличной (t 95 %д6= 2,12), а значение критерия Фишера (9,26) превосходило табличное значение (F99 %, 8,g.= 6,03), что обусловлено большой погрешностью методики 1 (6 %). Поэтому методики не могут считаться гармонизированными.

Следует отметить, что при анализе результатов количественного определения ХСН по методике 2 выявлена тенденция к незначительному их увеличению в области низких концентраций ХСН.

Особенно это различие было видно при выполнении титрования с обычной для этого метода скоростью. Линия тренда методики 2, построенная по точкам, соответствующим средним значениям результатов, полученных на трех уровнях диапазона измерения, не проходит через начало координат (рис. 10).

Наряду с визуальным способом регистрации точки эквивалентности в фармакопеях предусмотрено фотометрическое определение с использованием специального датчика, фототрода. Исследования, полученные с использованием фототрода фирмы Mettler Toledo, продемонстрировали сохранение той же тенденции.

Использование калибровочной кривой и ограничение скорости титрования вблизи точки эквивалентности до 0,04 мл/мин, позволило уменьшить ошибку определения содержания ХСН методом турбидиметрическо-го титрования с 4 % до 2 %.

На основании проведенного исследования в проект ФС включена методика 2 количественного определения ХСН в субстанциях с двумя альтернативными способами регистрации точки эквивалентности — визуальным и фотометрическим с использованием фототрода.

Актуальным является вопрос об использовании стандартного образца ХСН в методике количественного определения. В зарубежных фармакопеях с этой целью используется USP Chondroitin Sulfate Sodium RS (USP CSS RS) и BP Chondroitin Sulfate Sodium CRS.

Результаты количественного определения ХСН_

Уровень Методика 1 Методика 2

Навеска, г Оптическая плотность * Найденное количество, % Навеска, г Объем тит-ранта, мл ** Найденное количество, %

Нижний уровень 0,0360 0,0405 0,0444 0,1814 0,2117 0,2275 96,97 100,59 98,61 0,0380 0,0409 0,0429 5,02 5,40 5,74 97,78 97,73 99,04

Среднее значение уровня 0,0403 0,2069 98,72 0,0406 5,39 98,18

Средний уровень 0,0457 0,0494 0,0542 0,2326 0,2465 0,2830 97,94 96,03 100,49 0,0477 0,0512 0,0528 6,32 6,70 7,00 98,07 96,86 98,13

Среднее значение уровня 0,0498 0,2540 98,15 0,0506 6,67 97,69

Верхний уровень 0,0555 0,0602 0,0642 0,2825 0,3060 0,3369 97,96 97,81 100,99 0,0594 0,0572 0,0600 7,80 7,54 7,84 97,20 97,57 96,72

Среднее значение уровня 0,0600 0,3085 98,92 0,0589 7,73 97,16

Уровень диапазона Метрологические характеристики

х,% S2 S х I Sr ±Дх ±Д х ± е ± Е

Нижний 98,72 3,27 1,04 1,83 7,78 4,49 7,88 4,55

Средний 98,15 5,00 1,29 2,28 9,61 5,55 9,79 5,65

Верхний 98,92 3,23 1,04 1,82 7,73 4,46 7.81 4,51

Диапазон измерения 98,60 2,88 0,57 1,72 4,00 1,33 4,06 1,37

Нижний 98,18 0,549 0,43 0,75 3,19 1,84 3,24 1,87

Средний 97,69 0,514 041 0,73 3,08 1,78 3,16 1,82

Верхний 97,16 0,183 0,25 0,44 1,84 1,06 1,89 1,09

Диапазон измерения 97,68 0,311 0,19 0,57 1,32 0,44 1,35 0,45

* — Средний результат трёх определений. ** — Средний результат двух определений.

С 2003 г. фирмой «Sigma» выпускается коммерческий образец ХСН (С6737), предназначенный для количественного определения методом турбидиметрического титрования.

В России выпускается ГСО ХСН. Для решения вопроса о его применимости для количественного определения ХСН методом турбидиметри-ческого титрования методика 2 была выполнена по ранее указанной схеме, но с использованием двух стандартных образцов (ГСО ХСН и USP CSS RS). Результаты представлены в таблице 4.

Результаты количественного определения ХСН с использованием

разных стандартов по методике 2.

Уровень ГСО ХСН USP CSS us

Навеска, г Объем тит-ранта, мл * Найденное количество, % Навеска, г Объем тит-ранта, мл * Найденное количество, %

Нижний уровень 0,0380 0,0409 0,4290 5,02 5,40 5,74 97,78 97,73 99,04 0,0356 0,0427 0,0432 4,74 5,64 5,78 98,26 97,48 98,74

Среднее значение уровня 0,0406 5,390 99,04 0,0405 5,39 98,16

Средний уровень 0,0477 0,0512 0,0528 6,32 6,70 7,00 98,07 96,86 98,13 0,0452 0,0507 0,0541 5,98 6.78 7,12 97,64 98,69 97,13

Среднее значение уровня 0,0506 6,67 97,69 0,0500 6,63 97,82

Верхний уровень 0,0594 0,0572 0,0600 7,80 7,54 7,84 97,20 97,57 96.72 0,0565 0,0608 0,0639 7,56 8,02 8,42 98,75 97,35 97,25

Среднее значение уровня 0,0589 7,73 97,16 0,0604 8,00 97,78

Уровень диапазона Метрологические характеристики

х,% S2 S х Sr ±Дх ±Д х ± Е ± е

Нижний 98,18 0,549 0,43 0,75 3,19 1,84 3,24 1,87

Средний 97,69 0,514 0,41 0,73 3,08 1,78 3,16 1,82

Верхний 97,16 0,183 0,25 0,44 1,84 1,06 1,89 1,09

Диапазон измерения 97,68 0,311 0,19 0,57 1,32 0,44 1,35 0,45

Нижний 98,16 0,407 0,37 0,65 2,74 1,58 2,79 1,61

Средний 97,82 0,636 0,46 0,82 3,43 1,98 3,51 2,02

Верхний 97,78 0,705 0,48 0,86 3.61 2,08 3,69 2,13

Диапазон изме-1 рения 97,92 0,437 0,22 0,68 1,56 0,52 1,59 0,53

* — Средний результат двух определений.

Вычисленные значения критерия Фишера (1,41) и критерия Стью-дента (0,90) были меньше табличных, что позволяет сделать вывод о возможности применения ГСО ХСН для количественного определения ХСН по методике 2.

Анализ лекарственных форм ХСН методом НПВО. Вопрос об идентификации ХСН в его лекарственных формах достаточно актуален, т. к., в основном, для этого используют неспецифическую реакцию с карба-золом. В настоящем исследовании проведено исследование методом НПВО лекарственных средств на основе ХСН: таблеток, капсул, растворов, мазей, гелей, лиофилизированных форм и установлена возможность его использования для подтверждения подлинности ХСН в лиофилизатах для приготовления растворов для внутримышечного введения и капсулах (рис.11 и 12).

Волновое число, см"1

Рис. 11. Спектры НПВО ХСН из хряща КРС (1) и лиофилизированных форм ХСН: препаратов «Хондролон» (2) и Хондростим (3).

Рис. 12. Спектры НПВО ГСО ХСН (1) и содержимого капсул препаратов: Хондрекс, капсулы (2); Структум, капсулы 250 мг (3); Артра хоцдронтин, капсулы 250 мг (4); Хондроитин-АКОС, капсулы (5).

При проведении анализа содержимого капсул (рис. 12) обнаружено, что входящие в состав капсул вспомогательные вещества: тальк (Структум); рисовая мука, кремния диоксид, магния стеарат (Артра хондроитин); сахар молочный, кальций стеариновокислый или стеариновая кислота (Хондроитин-АКОС, капсулы) не мешают данному определению.

При этом отмечено, что метод ИК-спектроскопии НПВО в некоторых случаях (Хондроитин-АКОС, капсулы) позволяет идентифицировать содержащиеся в их составе стеариновую кислоту или кальций стеарино-вокислый (область 2850-2980 см"1).

1. Установлена необходимость в разработке отечественного стандарта качества ХСН, гармонизированного с требованиями зарубежных фармакопеи.

2. Выявлено наличие на фармацевтическом рынке субстанций ХСН, различающихся по оттенку цвета, форме и размерам частиц порошка.

3. Установлено, что для подтверждения подлинности хондроитин-сульфата натрия следует использовать комплексный подход, учитывающий его сложную структуру: анализ функциональных групп и связанных сульфатов (ИК-спектроскопия), натрия (реакция с калия антимонатом), определение молекулярной массы (вискозиметрия), электрофоретической подвижности (электрофорез в агарозном геле), оптического вращения (по-ляриметрия).

4. Показана возможность использования метода НПВО для подтверждения подлинности гликозаминогликанов, в том числе ХСН, выделенного из разных источников и в ряде его лекарственных форм.

5. Сравнительный анализ требований зарубежных фармакопейных статей и экспериментальные исследования показали необходимость введения в проект ФС дополнительных показателей чистоты ХСН: свободные сульфаты и хлориды, содержание белка и родственных соединений.

6. С помощью процедуры валидации установлено, что спектрофо-тометрическая методика количественного определения ХСН по методу Дише (ФС), и турбидиметрическая методика титрования раствором це-тилпиридиния хлорида (ВЯ.РЬ., Еиг.РЬ., иЭР) не являются гармонизированными. Для количественного определения содержания ХСН предложено использовать методику турбидиметрического титрования раствором цетилпиридиния хлорида с двумя альтернативными способами регистрации точки эквивалентности: фотометрическим и визуальным. Показана целесообразность использования калибровочной кривой и ограничения скорости титрования при выполнении методики турбидиметрического титрования.

7. Установлена применимость отечественного ГСО ХСН для количественного определения методом турбидиметрического титрования.

8. На основании проведенных исследований составлен проект ФС «Хондроитинсульфат натрия» для ГФ XII изд., гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исаева И.В., Шкарина Т.Н., Пешая Т.В. Стандартизация лекарственных препаратов гликозаминогликанов // Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — М., 2003. — С. 718.

2. Шкарина Т.Н., Исаева И.В. Некоторые аспекты стандартизации хондроитин сульфата в составе лекарственных форм // Тезисы докладов XII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — М., 2005.-С. 814.

3. Шкарина Т.Н., Исаева И.В. Установление подлинности гликозаминогликанов в составе лекарственных средств с использованием ИК-спектроскопии // Сборник материалов II Всероссийского съезда фармацевтических работников — Сочи, 2005. — С. 164-165.

4. Шкарина Т.Н., Ковалева C.B., Лутцева А.И. Идентификация гликозаминогликанов. Использование метода ИК-спектроскопии горизонтального нарушенного внутреннего полного отражения. // Тезисы докладов XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — М., 2007.-С. 334.

5. Шкарина Т.Н., Ковалева C.B.,Павловская Л.П., Лутцева А.И. Идентификация натриевых солей хондроитин сульфата из различных источников. // Тезисы докладов XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — М., 2007. — С. 39.

6. Шкарина Т.Н., Исаева И.В., Ковалева C.B., Пешая Т.В., Лутцева А.И. «Лекарственные средства, содержащие хондроитин сульфат» // Фармация. — 2007. — № 3. — С. 42-48.

7. Шкарина Т.Н., Исаева И.В. ИК-спектроскопия гликозаминогликанов // 62-я региональная конференция по фармации и фармакологии — Пятигорск, 2007. — Вып. 62. — С. 421-423.

8. Шкарина Т.Н. Натриевые соли хондроитин сульфата из различных источников. Содержание белка. // Тезисы докладов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». — М., 2008. — С. 570.

Источник medical-diss.com

Для разработки количественного определения хондроитина сульфата в водном растворе ВЭЖХ методом использовали: — субстанцию хондроитина сульфата (предоставленную ОАО «Нижфарм»); — высокоэффективный жидкостной хроматограф «Shimadzu» с УФ — детектором; — интегратор «Shimadzu»; — хроматографическую колонку: u-Bondapark Waters С-18; 3,9 мм х 300 мм; — ацетонитрил "Sigma" (для ВЭЖХ); — натриевую соль октансульфоновои кислоты, степень чистоты для ВЭЖХ, "Sigma"; — триэтиламин, чда; — фосфорную кислоту, 85% , чда. Условия хроматографирования

Исходя из УФ-спектра водного раствора хондроитина сульфата (рис. 4) для измерения методом ВЭЖХ была выбрана длина волны 200 нм. Оптимальной оказалась скорость потока 0,6 мл/мин. Температура колонки — 20С. Подвижная фаза: в мерную колбу вместимостью 1000 мл добавляли 1,2 г натриевой соли октансульфоновои кислоты, 10 мл концентрированного буферного раствора и 100 мл ацетонитрила. Содержимое колбы водой дегазированной доводили до метки и перемешивали. Полученный раствор фильтровали и дегазировали в течение 10 минут.

Объем введения — 20 мкл. Время регистрации хроматограммы — 10 минут. Время удерживания хондроитина сульфата — около 1,8 минут. Приготовление растворов Концентрированный буферный раствор

В мерную колбу вместимостью 1000 мл добавляли 100 мл триэтиламина и 80 мл воды очищенной дегазированной. Осторожно добавляли 80 мл фосфорной кислоты. Перемешивали и охлаждали до комнатной температуры (около 20С). Устанавливали рН=2,23, доводили объем водой очищенной дегазированной до метки.

Стандартные растворы хондроитина сульфата

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещали 50 мг (точную навеску) хондроитина сульфата, добавляли 50 мл воды очищенной дегазированной и перемешивали. Доводили объем водой очищенной дегазированной до метки. Из полученного раствора путем разбавления водой очищенной дегазированной готовили стандартные растворы с концентрацией 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300 и 500 мкг/мл.

С целью количественной оценки содержания хондроитина сульфата в образцах проб строили калибровочный график (рис. 7) зависимости площади пика от концентрации препарата в диапазоне концентраций 1 — 500 мкг/мл (табл. 13).

Для оценки пригодности хроматографической системы рассчитывали следующие параметры: коэффициент емкости (к% число теоретических тарелок (N), селективность (а) и степень разделения (R).

Для вычисления этих показателей использовали общие фармакопейные статьи USP27 и ВР2004. Формулы для расчета хроматографических параметров разделения представлены в таблице 14.

Так как рассчитанный коэффициент Стьюдента был меньше табличного значения как для СФ, так и для ВЭЖХ метода анализа (табл. 16), то полученные данными методами результаты не отягощены систематической ошибкой.

  • 1. В результате исследования разработан метод спектрофотометрического анализа хондроитина сульфата, основанный на развитии метахроматической реакции сульфатированных глюкозаминогликанов с красителем — 1,9-диметилметиленовым синим. Оптическая плотность окрашенного раствора хондроитина сульфата регистрировалась при длине волны 500 нм. Зависимость оптической плотности от концентрации хондроитина сульфата носила линейный характер в диапазоне концентраций от 1 мкг/мл до 300 мкг/мл (г = 0,9939). Относительная ошибка спектрофотометрического метода количественного определения хондроитина сульфата с 1,9-ДМС находилась в диапазоне от 4,69 до 7,20%.
  • 2. Разработан метод количественного определения хондроитина сульфата методом ВЭЖХ. Исходя из УФ-спектра водного раствора хондроитина сульфата была выбрана длина волны 200 нм. Зависимость площади пика от концентрации раствора хондроитина сульфата носила линейный характер в диапазоне от 1 мкг/мл до 500 мкг/мл (г = 0,999). Время удерживания препарата -1,3 минуты, число теоретических тарелок — 643,13. Относительная ошибка результата для ВЭЖХ метода количественного определения ХС находилась в диапазона от 3,54 до 7,59%.
  • 3. Полученные СФ и ВЭЖХ методами результаты свободны от систематической ошибки. Проведение теста «Растворение» при разработке лекарственных средств в твердых дозированных формах позволяет выявить наиболее оптимальное соотношение и состав вспомогательных веществ, подобрать лекарственную форму.

В данной главе изучался профиль растворения различных препаратов хондроитина сульфата в сравнении с зарегистрированным оригинальным препаратом «Структум».

Источник studexpo.ru

Хондроитинсульфат – это пищевая добавка, встречающаяся в виде капсул или таблеток поваренной соли. В альтернативной медицине прием хондроитинсульфата рекомендуется при лечении дегенеративных болезней суставов, например, остеоартрита. В соответствии с Фармакопеей США содержание хондроитинсульфата натрия в пищевых добавках определяется путем проведения турбидиметрического титрования с помощью фототрода DP5.

Что такое пищевые добавки?
Пищевые добавки широко используются как дополнение к повседневному питанию и содержат дополнительные дозы витаминов, минералов, аминокислот и метаболитов. Обычно их употребляют в виде капсул, шипучих таблеток или сиропа. К одному из самых известных типов пищевых добавок относятся мультивитамины и минералы.

Сегодня широко распространены продукты, в состав которых входит не один активный ингредиент, а целый набор витаминов, минералов, других питательных веществ, растительных добавок, а также ингредиенты и экстракты животного и растительного происхождения [1]. Люди принимают пищевые добавки для общего укрепления здоровья, а также в надежде вылечить конкретное заболевание, поскольку считается, что в некоторых случаях пищевые добавки можно использовать как лекарство. Сравнительно недавно в связи с растущими требованиями потребителей, а также доказательствами того, что некоторые добавки действительно помогают пациентам, производство пищевых добавок было увеличено. Одновременно возросли и требования, предъявляемые к контролю качества на предприятиях, выпускающих добавки. Для обеспечения эффективного контроля качества на производственной линии требуются быстрые, надежные и точные аналитические технологии.

Хондроитинсульфат (CS) – это диетическая добавка, продаваемая в аптеках и бакалеях в виде капсул или таблеток поваренной соли. И хотя медики пока полностью не уверены в эффективности этого препарата, потребители уже используют хондроитинсульфат для лечения болей при остеоартрите. В результате медицинских исследований было доказано, что хондроитинсульфат помогает в лечении этой болезни. Также было обнаружено, что пациенты, страдающие от болей в спине или шее, употребляли эту питательную добавку в качестве альтернативного лечения [1].

Почему хондроитинсульфат является пищевой добавкой?
Хондроитинсульфат является составной частью хряща – структуры, покрывающей концы костей и защищающей их от механического трения и ударов. Содержащиеся в хрящевой ткани протеины смазывают суставы, предотвращая их от повреждения при движении. Для большей амортизации удара и улучшения смазывания полисахариды связываются с протеинами хряща. Каждый полисахарид состоит из сотен молекул сахара. Основная функция хондроитинсульфата, комплексного полисахарида, заключается в формировании такой структуры, удержании воды и питательных веществ и обеспечении движения других молекул через хрящевую ткань. Это является важнейшим свойством, поскольку в хрящах отсутствует кровь, обеспечивающая метаболитный обмен.

Клетки сустава непрерывно производят протеины для замены поврежденной хрящевой ткани. По мере разрушения хряща уменьшается и смазывание сустава.

В результате кости теряют хрящевую защиту и начинают стираться от соприкосновения друг с другом. Это приводит к резким болям, одному из симптомов остеоартрита – постепенного разрушения хряща. На сегодняшний день точная причина этой болезни неизвестна, и у традиционной медицины пока нет эффективного лекарства, которое бы позволило полностью остановить процесс разрушения хряща. Обычно медицинское лечение заключается в приеме болеутоляющих препаратов, но иногда полного успеха достичь не удается, и возникают нежелательные побочные эффекты.

При дегенеративных болезнях суставов, таких как остеоартрит, в процессе разрушения хрящевой ткани происходит потеря запасов хондроитинсульфата. Исследования показали, что применение хондроитинсульфата может способствовать заживлению костей. В частности, испытания показали, что хондроитинсульфат облегчает боль в суставах и, возможно, замедляет развитие остеоартрита. Прием хондроитинсульфата в качестве пищевой добавки может являться альтернативным лечением для пациентов, страдающих от этой болезни. В повседневном рационе человека хондроитинсульфат присутствует в недостаточном количестве, а его основным источником является хрящевая ткань животных (например трахея коровы). Лечение основывается на двух принципах: 1) хондроитинсульфат питает суставные хрящи, и 2) хондроитинсульфат блокирует действие энзимов, разрушающих структуру хряща.

Анализ хондроитинсульфата
Хондроитинсульфат – это химическое соединение из категории гликозаминогликанов, которое состоит из длинных цепочек полисахаридов (или сахаров) особого вида. В частности, хондроитинсульфат состоит повторяющихся блоков, включающих два компонента – глюкуроновая кислота и N-ацетилгалактозамин. В пищевых добавках хондроитинсульфат присутствует в виде поваренной соли. Сырье для производства хондроитинсульфата натрия получают из хрящевой ткани здоровых домашних животных, мясо которых употребляется в пищу (коровы, свиньи и куры). В пересчете на сухое вещество содержание хондроитинсульфата натрия составляет от 90,0 до 105,0% [2].

В соответствии с Фармакопеей США содержание хондроитинсульфата определяется турбидиметрическим титрованием при длине волны 420, 550 или 660 нм с использованием цитилпиридиний хлорида (гексадецилпиридиний хлорид, CPC, C21H38ClN) в качества титрирующего раствора [2]. В результате добавления CPC к раствору образца образуется комплекс ионных пар с хондроитинсульфатом. Образованное вещество выпадает в осадок и вызывает помутнение, которое контролируется погруженным в раствор фототродом Phototrode™ DP5, DP550 или DP660 МЕТТЛЕР ТОЛЕДО.

Phototrode™ – это фотометрический датчик, используемый для наблюдения за изменениями цвета и уровнем помутнения в изучаемом растворе. Датчик измеряет затухание проходящего через образец луча света в результате его абсорбции и рассеивания света при титровании. Затухающий луч света отражается на детектор с помощью вогнутого зеркала, расположенного на дне измерительной ячейки.

Точная стехиометрия, т.е. соотношение между продуктом и выделенным веществом, реакции осаждения между хондроитинсульфатом и титрирующим раствором CPC неизвестна. Перед проверкой состава раствора выполняется калибровка титратора с помощью стандартного раствора с известной концентрацией (мг/мл) чистого хондроитинсульфата. Зная расход титранта на эквивалентную точку, можно определить коэффициент F в мг/мл, который показывает количество хондроитинсульфата в миллиграмме вещества, титрованном 1 мл раствора CPC. Впоследствии этот коэффициент используется для определения содержания хондроитинсульфата в образцах.

Например, титрованием CPC на основе описанной выше процедуры было определено содержание вещества в 400-миллиграммовых капсулах хондроитинсульфата. Учитывая неоднородность вещества в каждой капсуле, было смешано содержимое пяти капсул. Порошок осторожно перемешали и взяли количество, достаточное для получения примерно 100 мг хондроитинсульфата в мерной колбе объемом 100 мл. Затем была добавлена вода и буферная жидкость с pH 7,2, и, поскольку порошок не обладает полной растворимостью из-за присутствия наполнителей (например, карбоната кальция и других добавок), образец был обработан ультразвуком. Колбу наполнили водой до контрольной отметки, содержимое перемешали и подвергли центрифугированию. После фильтрации была взята аликвотная проба 5 мл. Вещество, содержащееся в этой пробе, было титровано с помощью CPC.

Коэффициент восстановления, представленный в виде процентов, был получен в результате измерения при воздействии волн разной длины, т. е. 555 и 660 нм, с помощью фототрода МЕТТЛЕР ТОЛЕДО и наблюдения за уровнем помутнения при длине волны 420 нм. Кроме того, система была протестирована путем титрования стандартного раствора чистого хондроитинсульфата натрия (Bioiberica, подтвержденное значение: 101%). Восстановление было практически одинаковым при любой длине волн, разница заключалась в небольших погрешностях измерений. Однотипность (точность), указанная в процентах как относительное стандартное отклонение, показывает допустимые значения с погрешностью 1 – 0,4%.

Заключение
Определение содержания хондроитинсульфата натрия в диетических добавках выполняется путем титрования с применением CPC с последующим выпадением в осадок хондроитинсульфата в растворе образца и наблюдением за увеличением помутнения при титровании. Анализ может выполняться автоматически с помощью фототрода DP5 Phototrode™. Для выполнения полностью автоматического анализа большого количества образцов одновременно с титратором используется автоматический податчик образцов Rondo 60.

Источник www.press-release.ru

Комментировать
0
31 просмотров
Комментариев нет, будьте первым кто его оставит

Это интересно
Adblock detector